Методы исследования гуморального иммунитета. А. Исследование гуморального иммунитета. Комплексное исследование гуморального иммунитета

Содержание:

Что такое гуморальный иммунитет

Гуморальный иммунитет является системой защиты организма, обеспечиваемой за счет веществ межклеточной среды (антител, секретов желез, ферментов). В традиционной классификации иммунитета ему противопоставляется клеточный, однако подобное деление условно, поскольку работа этих механизмов тесно связана.

Принципы функционирования гуморального иммунитета

Гуморальный иммунитет требует присутствия веществ из двух категорий:

1. Неспецифические факторы иммунитета являются химическими соединениями, подавляющими развитие бактерий и вирусов. К ним относятся белки плазмы крови (интерфероны, маркеры), секреты эндокринных желез, некоторые ферменты (лизоцим).
2. Специфические факторы иммунитета представлены антителами. Они вырабатываются белыми клетками крови В-лимфоцитами и реагируют на определенные антигены – потенциально опасные инородные вещества и агенты.

Все биологически активные вещества работают в тесной связке с клетками крови, отвечающими за защиту тела человека от патогенных организмов.

Видео: Передача «Жить здорово!» о гуморальном типе иммунного ответа

Пути формирования антител в организме человека

Часть антител попадает в организм ребенка от матери во время внутриутробного развития. Они относятся к тем, что были созданы в процессе эволюции человека. Другая группа факторов поступает к малышу после его рождения с грудным молоком.

Самостоятельная выработка антител организмом человека происходит при знакомстве с новыми антигенами (например, при заболеваниях) и осуществляется неравномерно. На первые сутки их количество незначительно, затем оно волнообразно нарастает с пиком на 4 день, после чего так же постепенно спадает.

Инъекционное введение готовых антител возможно при острой необходимости во время болезни. Решение о проведении подобной процедуры принимается лечащим врачом на основании данных анализов и оценки тяжести состояния пациента.

Организм способен запоминать антигены. В этом случае при повторном их попадании он быстро справляется с болезнью. Именно эта особенность делает возможным применение вакцин.

Нарушения в работе механизма гуморального иммунного ответа

Работоспособность гуморального иммунитета затрагивает две группы патологий:

1. Нарушения функции непосредственно этой разновидности иммунитета вызываются врожденными патологиями механизмов выработки белков иммуноглобулинов, приводят к развитию синдромов, характеризующихся повышением чувствительности к определенным микроорганизмам или недостаточной активностью желез.
2. Сбои в функционировании иммунитета общего характера включают синдром неполноценных лимфоцитов, пороки развития и формирования тканей иммунной системы.

Неправильная или недостаточная работа иммунитета способна приводить к развитию серьезных заболеваний: различных типов аллергии, болезни Крона, атопического дерматита, колита, системной красной волчанки, ревматоидного артрита. Изучение работы звеньев иммунитета оценивается с помощью иммунограммы. Она представляет собой расширенный анализ крови с определением ряда показателей состава и активности лимфоцитов.

Показатели гуморального иммунитета

Для оценки работоспособности гуморальной составляющей иммунного ответа применяются данные, демонстрирующие содержание антител в сыворотке крови.

Показатели крови

Характеристика антител включает описание их роли в работе защитных сил организма, время выработки и другие свойства, позволяющие использовать данные иммунограммы для постановки диагноза и разработки схемы лечения:

Каждый тип иммуноглобулинов играет свою роль в обеспечении комплексной реакции организма на заражение.

Симптомы ослабления гуморального иммунитета

К внешним проявлениям недостаточности иммунитета относятся:

Снижение эффективности защитных сил организма выражается в симптоматике общего характера. Тесная связь в работе клеточного и гуморального механизмов мешает описывать эти признаки отдельно для каждого из них.

Принципы восстановления работоспособности иммунной системы

Для активации ослабленных защитных сил организма важно определить причину сбоев в их работе. Повреждение определенных звеньев иммунитета может приводить к конкретным заболеваниям со специфической симптоматикой или выражаться в общем снижении качества здоровья и уровня сопротивляемости инфекционным заболеваниям.

Компенсация или лечение болезней, негативно сказывающихся на работе гуморального иммунитета, автоматически способствует его скорейшему восстановлению без принятия дополнительных мер. К таким патологиям относится сахарный диабет , некоторые хронические заболевания.

Коррекция образа жизни также необходима для решения вопроса о поднятии показателей работоспособности иммунной системы. Она включает:

• избавление от вредных привычек;
• соблюдение режима сна и бодрствования, отдыха и работы;
• высокую двигательную активность и ежедневное пребывание на свежем воздухе;
• здоровый рацион.

Гуморальный иммунитет можно также эффективно восстанавливать посредством применения витаминно-минеральных комплексов, рецептов народной медицины и специализированных препаратов. Комплексные витамины и микроэлементы необходимо употреблять согласно инструкции, избегая передозировки. Курс приема особенно полезен в весенний период года.

Морсы из кислых северных ягод, мед, имбирь , шиповник, боярышник, алоэ и другие продукты служат адаптогенами и антисептиками мягкого действия. Настойки прополиса, эхинацеи , родиолы розовой, женьшеня являются эффективными средствами природного происхождения для восстановления защитных сил организма.

Предупреждение: Прием препаратов и витаминно-минеральных комплексов для поднятия любого типа иммунитета не будет эффективным в случае, когда не найдена и не устранена причина нарушения его работы.

Лекарственные препараты-иммуномодуляторы должны приниматься по назначению врача.

Гуморальный иммунитет оценивают с помощью определения количества В-лимфоцитов, концентрации сывороточных иммуноглобулинов классов М, G, А и титров сывороточных антител к различным антигенам. Сюда же относится выявление гетерофильных антител к кишечной палочке и стафилококку, а также тесты на иммунные комплексы антиген - антитело.

Метод комплементарного розеткообразования. Метод учитывает тот факт, что на мембране В-лимфоцитов расположены рецепторы к Fc-фрагментам иммуноглобулинов и к третьему компоненту комплемента.

Нагружая эритроциты человека иммуноглобулинами или комплексом иммуноглобулинов и комплемента, добиваются соединения эритроцитов с В-лимфоцитами. Как и при подсчете Т-лимфоцитов, розеткообразующим считается лимфоцит, к которому прикреплено не менее трех эритроцитов.

На мембране В-лимфоцитов имеются также рецепторы к эритроцитам мыши. В связи с этим ряд авторов предлагают определять число В-лимфоцитов с помощью метода спонтанного розеткообразования с эритроцитами мыши. Более точные методы выявления В-лимфоцитов основаны на обработке лимфоцитов флюоресцентными антииммуноглобулиновыми сыворотками против того или иного класса иммуноглобулинов.

При этом подсчет В-лимфоцитов производят с помощью флюоресцентного микроскопа или автоматического лазерного сортера клеток с использованием моноклональных антител. В периферической крови здорового человека В-лимфоциты составляют 10 - 30% общего числа лимфоцитов, или 100 - 900 клеток в 1 мм 3 крови.

Определение концентрации иммуноглобулинов в сыворотке крови. Наибольшее распространение получил метод радиальной иммунодиффузии в геле по Манчини. Принцип метода заключается в том, что образцы исследуемых сывороток помещают в лунки агара, содержащего антитела против того или иного класса иммуноглобулинов. Иммуноглобулины из сыворотки диффундируют в агар и взаимодействуют с антителами, образуя кольца преципитации. О содержании иммуноглобулинов в сыворотке судят по величине диаметра кольца преципитации.

Существует также методика определения концентрации иммуноглобулинов в сыворотке крови с помощью лазерной нефелометрии. Она предполагает использование моноспецифических кроличьих антисывороток против иммуноглобулинов человека, отличается высокой точностью и быстротой исполнения.

Нормальным считается следующее содержание иммуноглобулинов в сыворотке крови здорового человека: М - 0,5 - 2 г/л, G - 7 - 20 г/л, А - 0,7 - 5 г/л.

Определение изогемагглютининов (альфа-, бета) и гетерофильных антител. Уровень изогемагглютининов определяют с помощью эритроцитов человека АВ (IV) группы крови, а для определения титра гетерофильных антител в качестве антигенов используют убитую культуру кишечной палочки, стафилококка, стрептококка и других часто встречающихся микробных тел.

Реакцию агглютинации ставят с сывороткой крови человека в разных разведениях, кратных 2. Метод полуколичественный и позволяет учитывать последнее разведение сыворотки, в которой видна агглютинация.

Изучение антителогенеза после активной иммунизации. Этот метод используют редко. Он доступен только в условиях клиники и применяется для решения вопроса о полноценности иммунного ответа.

Обследуемого больного активно иммунизируют различными убитыми вакцинами: дифтерийной, столбнячной, пневмококковой, менингококковой и др. По величине титров антител в сыворотке крови определяют полноценность иммунного ответа. Эти исследования противопоказаны при заболеваниях почек, печени, аллергических состояниях и у онкологических больных.

РБТЛ, стимулированная специфическими для В-лимфоцитов митогенами. Специфичным для В-лимфоцитов является митогенлаконоса, принцип реакции аналогичен таковой для Т-лимфоцитов.

Биопсия лимфатических узлов, костного мозга, участков слизистой оболочки тонкого кишечника. Эту процедуру проводят с целью гистологического обнаружения плазматических клеток, наличия и структуры лимфоидных фолликулов.

Дефектность гуморального иммунитета принято определять как по уменьшению числа В-лимфоцитов, так и по понижению концентрации иммуноглобулинов и титров антител. Кроме того, наблюдаются дисфункции, при которых развиваются дисгаммаглобулинемии, характеризующиеся повышением концентрации иммуноглобулинов одного из классов и понижением содержания иммуноглобулинов других классов.

Понижение или повышение концентрации иммуноглобулинов одного или двух классов возникает также на фоне нормального содержания других классов иммуноглобулинов. Успех коррекции подобных расстройств зависит от правильности клинического диагноза и рационального лечения основного заболевания с применением иммунотропных препаратов.

«Коррекция иммунитета у больных раком
предстательной железы», В.А.Савинов

1. Методы первого уровня основаны на доказательстве взаимодействия в системе антиген-антитело. Положительные результаты свидетельствуют о специфичности реакций. В принципе можно выделить три типа реакций:

Тест конъюгации. При этом маркируют один из реагентов, результаты оценивают по его связыванию с другими реагентами на основании физических или химических свойств конъюгата (прямая иммунофлюоресценция, иммунопероксидазный метод, ауторадиография);

Тесты, основанные на изменении свойств одного из реагентов (например, изменение флюоресценции, электрического потенциала, вязкости раствора; синтез соединений с более высокой молекулярной массой, изменение ферментативной активности антигенов). Эти тесты обладают ограниченными возможностями;

Тесты, основанные на отделении комплекса антиген-антитело от несвязанных реагентов с помощью техники высаливания, преципитации, использования специфических антител или адгезии на клеточной поверхности. К ним следует отнести большинство радио- и иммуноферментных методов.

2. Методы второго уровня основаны на более сложном характере взаимодействия между антигеном (поливалентным) антителом (по меньшей мере двухвалентными антителами). При этом механизмы преципитации, агглютинации и т. д., лежащие в основе комплекса, в большей степени, чем при методах первого уровня, зависят от рН, ионной силы и других условий реакции. Поэтому положительные результаты не всегда определяют степень выраженности реакции антиген-антитело, а отрицательные еще не означают отсутствия этой реакции. Тем не менее, среди методов этой группы можно отметить и такие иммунологические тесты, которые имеют особое значение для клинической практики.

К методам второго уровня относятся следующие реакции: преципитация, агглютинация, реакция связывания комплемента. Промежуточное положение между методами первого и второго уровней занимают исследования на изолированных клетках, например цитолиз или феномен освобождения медиаторов с участием эозинофилов.

Реакции, основанные на феномене агглютинации . В отличие от реакции преципитации при агглютинации антиген представлен в корпускулярной форме (прямая агглютинация эритроцитов или бактерий) либо связан на частицах носителя (непрямой вариант, пассивная агглютинация). Механизм агглютинации изучен еще не полностью. Согласно одной из теорий, главная роль принадлежит специфической адсорбции антител на поверхности клеток, что приводит к снижению поверхностного потенциала или повышению гидрофобных свойств мембраны. В пользу этой теории свидетельствует тот факт, что агглютинация, как и преципитация, в значительной мере зависит от присутствия микроколичеств электролитов. Согласно другой концепции, а это соответствует теории «решетки» Marrack, агглютинация происходит при условии, если один активный центр двухвалентного антитела соединяется с одной антигенной детерминантой, а второй активный центр - с другой детерминантой. Избыток или недостаток антител приводит к торможению агглютинации. Хотя такие свойства, как размеры частиц и структура Ig, вносят коррективы в интерпретацию данных, тем не менее важные аргументы свидетельствуют в пользу этой теории.

Подобно преципитации данный метод используют как полуколичественный анализ, с помощью которого определяют то максимальное разведение сыворотки, при котором еще возможна агглютинация. Результаты можно оценивать макроскопически. Чувствительность агглютинации значительно варьирует при использовании разных систем антиген-антитело. Кроме того, агглютинация - это более чувствительный метод, чем реакция преципитации (почти в 103 раз). При оптимальных условиях удалось выявить антитела с минимальной концентрацией да 0,05 мл. Ig известных классов обладают разными агглютинационными свойствами. Так, способность к агглютинации молекул IgM в 60-180 раз выше, чем молекул IgG.

Прямая реакция агглютинации происходит при условии, если антиген является элементом клеточной мембраны или присутствует на поверхности других частиц (эритроцитов, бактерий, частиц пыльцы). Постановка этой реакции осуществляется как в пробирках (тогда результаты оценивают после седиментации), так и в лунках, расположенных на специальной пластине. В частности, определение группы крови человека - это общепринятый экспресс-метод, также основанный на феномене агглютинации. Для идентификации группы крови каплю суспензии эритроцитов смешивают с каплей стандартной агглютинирующей сыворотки определенной специфичности: при положительной реакции агглютинаты видны уже макроскопически, если реакция отсутствует, то суспензия эритроцитов сохраняет гомогенность.

Антиглобулиновый тест (реакция Кумбса). Антиглобулиновый тест служит для доказательства присутствия в сыворотке неагглютинирующих или «неполных» антител. Наиболее часто этот метод используют при диагностике болезней крови, обусловленных иммунным гемолизом. Первоначально исследователи применяли антиглобулиновую сыворотку (против глобулина человека), однако позднее было установлено, что она реагирует с компонентами комплемента. В настоящее время вместо нее интенсивно внедряют моноспецифические антисыворотки против определенных классов Ig (моноклональные антитела). Прямой вариант теста служит для обнаружения связанных с клеткой «неполных» антител; при непрямом варианте выявляют циркулирующие антитела: исследуемую сыворотку предварительно инкубируют с эритроцитами, а затем воспроизводят прямой тест. Разработана постановка антиглобулинового теста в комбинации с пассивной гемагглютинацией для выявления как неагглютинирующих аутоантител, так и реагинов. И, наконец, непрямая техника флюоресценции - это также одна из модификаций антиглобулинового теста.

Тест потребления антиглобулина (тест Штеффена). Следует обратить внимание на этот метод, хотя в данном случае мы имеем дело лишь с индикаторной реакцией. С помощью этого теста можно выявить антитела к антигенам клеток тканей, клеточных ядер или нерастворимых элементов тканей. Определить эти антитела с помощью реакции агглютинации невозможно. При непрямом варианте теста антигены (гомогенизированные ткани) инкубируют с исследуемой сывороткой, а затем тщательно отмывают для удаления несвязанных антител. Далее с этим гомогенатом инкубируют антиглобулиновую сыворотку с заранее известным титром. В результате происходит потребление антиглобулина антителами, адсорбированными на тканях. В соответствии с этим титр антиглобулиновой сыворотки снижается. Уровень исследуемых антител до и после инкубации определяют с помощью индикаторной системы, состоящей из сенсибилизированных неполными антителами эритроцитов, поэтому данный вариант можно рассматривать как модификацию реакции торможения гемагглютинации. При постановке прямого варианта теста предварительную инкубацию с исследуемой сывороткой не производят.

Данный метод применяют для определения аутоантител при ревматоидном артрите , антител к ДНК при системной красной волчанке , а также для доказательства выработки антител к антигенам на лейко- и тромбоцитах. Метод зависит и от многочисленных неспецифических факторов - вот почему особую важность приобретают соответствующие способы контроля. При интерпретации результатов не следует забывать, что общепринятая техника может демонстрировать связывание глобулинов, не всегда обусловленное комплексом антиген-антитело.

Реакция связывания комплемента . Это непрямой метод для выявления антител или антигенов. Реакция основана на том, что комплемент принимает участие в многочисленных реакциях типа антиген-антитело. Постановку опыта осуществляют в два этапа: на I этапе исследуемую сыворотку и известный антиген инкубируют с комплементом, на II - готовят индикаторную систему, состоящую из гемолитической сыворотки и эритроцитов, и добавляют к смеси реагентов. Если I этап опыта завершается реакцией антиген-антитело, то происходит связывание комплемента, при этом гемолиз индикаторных эритроцитов отсутствует или выражен незначительно. Если в исследуемой системе не образуется комплекс антиген-антитело, то комплемент полностью включается в индикаторную систему, что приводит к гемолизу. В качестве источника комплемента обычно служит свежая сыворотка крови морской свинки. Ее комплемент реагирует с антителами всех видов млекопитающих. В индикаторной системе используют, как правило, эритроциты барана, сенсибилизированные кроличьими антителами к эритроцитам барана.

Реакция иммунного гемолиза и цитотоксический тест . Иммунный гемолиз может служить доказательством, с одной стороны, активности комплемента, с другой - цитотоксического эффекта антител к эритроцитам, поэтому указанные реакции важны для иммуногематологической диагностики. Пассивную гемагглютинацию можно преобразовать в реакцию пассивного гемолиза, при этом смесь реагентов должна состоять из антител, эритроцитов, нагруженных соответствующим антигеном, и комплемента.

Цитологический тест информативен при изучении патогенетических механизмов. Тем не менее возможности его использования довольно ограничены, учитывая сложность методов клеточного культивирования. Цитотоксические реакции могут быть опосредованы антителами (активация комплемента), клетками-киллерами и сенсибилизированными Т-лимфоцитами.

Тест нейтрализации . Принцип теста состоит в том, что определенные биологические свойства антигена нейтрализуются при воздействии антител. Наиболее широко его применяют для выявления антитоксических (столбняк , дифтерия) и антивирусных антител.

Прочие методы . Кроме методов, ранее описанных в отдельных главах (анафилаксия in vitro по Шульцу-Дейлу, освобождение гистамина из базофильных гранулоцитов и тучных клеток, кожные пробы, «разрешающая» доза аллергена как тест оценки иммунного ответа, пассивная кожная анафилаксия и реакция Прауснитца-Кюстнера), следует назвать способы доказательства продукции IgE, диагностические тесты для анализа иммунных комплексов, методы выявления аутоантител при аутоиммунных заболеваниях.

У человека два типа иммунитета — клеточный и гуморальный иммунитет. Оба вида иммунитета исполняют разные функции, однако плотно связаны между собою. Поэтому разделение обоих видов относительное. Гуморальный иммунитет – способность исключить инфицирования благодаря антителам. Они присутствуют в плазме крови, слизистой органов зрения, слюне.

Этот вид иммунитета вырабатывается в утробе матери, переходит плоду через плаценту. Антитела поступают ребенку уже в течение первых месяцев жизни через молоко матери. Молоко оберегает ребенка от интенсивного влияния множественных типов микробов и микроорганизмов. Вскармливание грудью – ключевое обстоятельство развития иммунной системы малыша.

Производится защитная функция организма от инфекционных заболеваний таким образом: Когда запоминается антиген при конкретном заболевании. Если инфекция вновь попадет в организм, то антитела узнают ее и истребляют патогенные организмы. Во время прививок вводится препарат, чтобы в дальнейшем узнать антиген и поглотить его.

Гуморальный и клеточный иммунитет: особенности функций

Иммунитет клеточный оберегает от вирусных болезней, вызванных патогенными грибами, опухолей. Непосредственно этот вид берет участие в отторжении различных чужеродных тканей, аллергических откликов и производится фагоцитами. Эти клетки оберегают организм методом поглощения (фагоцитоза) чужеродных веществ, частиц, микроорганизмов. В крови присутствуют в большей мере гранулоциты и моноциты.

Первые считаются разновидностью лейкоцитов, обеспечивают защитные силы организма. Они первыми замечают воспалительный процесс.

Вторая разновидность лейкоцитов относится к крупным кровяным клеткам. Моноциты защищают от вирусов и инфекций, поглощают сгустки крови, оберегают от формирования тромбоза, борется с опухолями. Для иммунной защиты нужен процесс фагоцитоза (поглощения), когда чужеродное вещество поглощается фагоцитами.

Оба иммунитета не могут существовать и функционировать один без другого. Разница их заключается в функциональности. Когда гуморальный иммунитет борется непосредственно с микроорганизмами, то клеточный с грибком, раком и различными микробами. Для нормальной работы иммунной системы важны 2 типа иммунитета.

Для увеличения защиты, следует постоянно пить витамины, вести здоровый образ жизни. Также снижение иммунитета характеризуется постоянными недосыпаниями и нагрузками на организм. В последних вариантах понадобиться принятие препаратов регулирующих иммунную систему. Иммунитет – один с факторов самочувствия. Когда не поддерживать деятельность иммунной системы в норме, то все микробы, инфекции будут атаковать организм постоянно.

Восстановление иммунитета

Для регенерации слабой иммунной защиты изначально необходимо выяснить первопричину сбоев. Нарушение конкретных звеньев иммунной системы считается источником определенных болезней. Слабое сопротивление организма инфекциям может также указывать на проблемы с иммунитетом. Лечение заболеваний снизивших иммунитет содействуют его быстрому восстановлению. К таким болезням относится диабет, а также хронические заболевания.

Изменение образа жизни считается одним из лучших способов в решении вопроса о том как повысить гуморальный иммунитет.

Метод охватывает:

• отказ от курения и алкоголя;
• соблюдение режима сна и бодрствования;
• занятие спортом и прогулки на свежем воздухе;
• закаливание организма;
• сбалансированное питание с витаминами.

Гуморальный иммунитет результативно возобновлять с помощью приема витаминов, средств народной медицины и специальных лекарств. Любые средства по восстановлению иммунной системы назначаются иммунологом в точной дозировке, по инструкции. Прием витаминов и минералов особенно полезно весной. Ягодные морсы, мед, шиповник, алоэ могут восстановить иммунитет.

Принятие лекарственных веществ и витаминов для повышения любого вида иммунитета не даст результатов, когда не обнаружен, не ликвидирован главный фактор его снижения. Фармацевтические средства выписывает доктор. Самолечение запрещено.

Механизм гуморального иммунитета

В базе реализации гуморального иммунитета находится механизм влияния веществ, истребляющих патогенные бактерии через кровь. Подобные элементы делят на группы – специфические (помогает Энджерикс) и неспецифические. К условиям неспецифической природы причисляют клетки врожденного иммунитета, что подавляют микроорганизмы.

К группе относят:

• Сыворотка крови;
• Секреты желез, подавляющих формирование бактерий;
• Фермент лизоцим. Антибактериальный агент уничтожает хим. взаимосвязи в структуре стены патогенных организмов;
• Муцин входит в железы выделяющие слюну. Это углеводы и белки, которые называют гликопротеинами. Необычный состав дает возможность главным гликопротеинам слизи охранять клеточные слоя от воздействия токсических веществ;
• Пропердин – белок сыворотки крови из группы глобулинов, отвечает за свертывание крови;
• Цитокины – небольшие пептидные сигнальные (управляющие) молекулы. Они передают сигналы между данными клетками. Выделяют пару групп, основной из которых считается интерфероны;
• Интерфероны (аутогенные гликопротеины)– вещества белковой природы, обладающие общими защитными свойствами. Если начинается воспалительный процесс они подают сигнал. Кроме этой способности они подавляют возбудителей болезней. Выделяют ряд видов аутогенных гликопротеинов. Альфа и Бета возникают при вирусном инфицировании, а Гамма образовывается благодаря клеткам иммунитета.

Стоить рассмотреть понятие система комплемента — белковые комплексы, которые исполняет функцию обезвреживания бактерий. Система комплемента включает до двадцати белков со своим порядковым номером (C1, C2, C3 и другие).

Иммунология

Специфический отклик – одиночный фактор. Например, в детстве ребенок переболел оспой. Будучи взрослым, он не будет больше болеть данным заболеванием, поскольку уже выработался иммунитет. Также это касается всех тех прививок, которые человеку сделали в раннем возрасте.

Неспецифическая форма предполагает многоцелевую защиту, врожденную, включая отклик организма на попадание в тело инфекции.

Гуморальный иммунный ответ — синтез антител В-клетками в ответ на появление в теле человека патогенных организмов. По мере развития гуморального иммунного ответа с этапа определения антигена до более интенсивной продукции антител совершаются 2 основных действия:

• переход синтеза антител с одной разновидности в другую;
• увеличение прочности связывания активных зон антител с реакционноспособными группами антигена.

Местом формирования считаются фолликулы с дополнительной оболочкой либо места концентрации В-лимфоцитов в лимфоидной ткани. На периферии фолликул происходит определение антигена. В процесс вступает субпопуляция Т-лимфоцитов, оказывающая помощь в продукции антител. В-лимфоциты приступают усиленно делиться.

Совершается переключение иммуноглобулиновых генов, увеличивается число вероятных мутаций. На плоскости лимфоцитов возникают разные типы иммуноглобулинов класса G. В-клетки клонов в местах размножения, отбираются по признаку высокой степени сродства их рецепторов. Клетки, имеющие повышенную степень аффинности дифференцируются в:

• плазматические клетки;
• клетки, хранящие информацию о ранее действовавших антигенах.

Участие образовавшихся антител выражается в 3 формах:

1. реакция нейтрализации микроорганизмов;
2. усиленная фагоцитарная активность;
3. активации комплекса сложных белков.

Возбудители болезней в ходе существования в организме хозяина попадают во внеклеточную среду. Присутствие в жидкостях организма бывает долгим (если говорить о внеклеточных патогенных бактериях) либо меньшим, когда организм поражен внутриклеточными микроорганизмами.

При обычной иммунной деятельности возбудители инфекций, токсические вещества, присутствующие за пределами клеток хозяина, подвергаются воздействию таких иммуноглобулинов:

• Эффекторная молекула — молекула небольшая, концентрация которой регулирует активность молекулы белка;
• В-лимфоциты способны продуцировать антитела в двух формах — мембраносвязанной и секретируемой (растворимой).

Почему снижается иммунитет

Снижение работы иммунной системы имеет конкретные предпосылки, которые указывают на проблемы со здоровьем. Их относительно делят на ряд групп:

Неправильный образ жизни:

• скудное питание;
• болезненное состояние, возникающее при недостаточном поступлении в организм витаминов по сравнению с их расходованием;
• состояние, характеризующееся низким содержанием гемоглобина или красных кровяных клеток в крови;
• переизбыток либо недостаток физических нагрузок;
• нарушений режим сна;
• употребление спиртного, курение;
• плохая экология;
• отравление организма выбросами.

Иммунитет может понижаться по причине заболеваний:

• патологии кровеносной системы;
• диарея из-за нарушенного всасывания (нарушение пищеварительно-транспортной функции тонкой кишки);
• быстрое и резкое снижение функции почек и печени;
• самоотравление организма азотистыми соединениями, такими как мочевина, мочевая кислота, креатинин и индикан;
• ВИЧ-инфекция;
• иммунодефициты врожденного и полученного характера;
• онкологические заболевания;
• длительное антибактериальное лечение;
• химиотерапия;
• гельминты.

Не нужно заниматься самолечением, так как повышение иммунитета - дело не из простых. В связи с этим нужен медицинский контроль.

Комплексное исследование гуморального иммунитета

Иммунограмма – список характеристик, которые расшифровывают по результатам анализа крови. Таким образом, можно узнать о работе иммунной системы. Однако с процедурой невозможно узнать фактор заболевания. Выяснить, есть ли иммунитет к какому-то конкретному заболеванию, тоже не выйдет.

У иммунной системы непростой механизм. Поэтому характеристики оцениваются не лишь по числу, однако, по их соответствию и динамике. Как правило, в иммунограмме указываются последующие характеристики:

• Численность лимфоцитов;
• Т-лимфоциты (распознают антиген и сообщают В- лимфоцитам);
• Т-хелперы (главной функцией которых является усиление адаптивного иммунного ответа);
• Естественные киллеры (большие гранулярные лимфоциты, являющиеся частью врожденного иммунитета);
• В-лимфоциты (получив информацию, выделяют антитела);
• Уровень иммуноглобулинов истребляющих патогенные микроорганизмы;
• Маркер гибели клеток.

Захваченные антителами чужеродные элементы, что в скором времени должны раствориться. Когда их накапливается очень большое количество, то это критерий аутоиммунных болезней. То есть организм не распознает свои клетки, формирует антитела для атаки (повышенный уровень сахара в крови, поражение миелиновой оболочки нервных волокон головного и спинного мозга., воспалительное заболевание соединительной ткани суставов).

Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

Размещено на http://www.allbest.ru/

Введение

Клеточный иммунитет (англ. Cell-mediated immunity ) - это такой тип иммунного ответа, в котором не участвуют ни антитела, ни система комплемента. В процессе клеточного иммунитета активируются макрофаги, натуральные киллеры, антиген-специфичные цитотоксические Т-лимфоциты, и в ответ на антиген выделяются цитокины.

Иммунная система исторически разделена на две части - систему гуморального иммунитета и систему клеточного иммунитета. В случае гуморального иммунитета, защитные функции выполняют молекулы, находящиеся в плазме крови, но не клеточные элементы. В то время как в случае клеточного иммунитета защитная функция связана именно с клетками иммунной системы. Лимфоциты кластера дифференцировки CD4 или Т-хелперы осуществляют защиту против различных патогенов.

Система клеточного иммунитета выполняет защитные функции следующими способами:

· путём активации антиген-специфических цитотоксичных Т-лимфоцитов, которые могут вызывать апоптоз соматических клеток, демонстрируя на поверхности эпитопы чужеродных антигенов, например, клеток, заражённых вирусами, содержащими бактерии и клеток опухолей, демонстрирующих опухолевые антигены;

· путём активации макрофагов и натуральных киллеров, которые разрушают внутриклеточные патогены;

· путём стимулирования секреции цитокинов, которые оказывают влияние на другие клетки иммунной системы, принимающие участие в адаптивном иммунном ответе и врождённом иммунном ответе.

Клеточный иммунитет направлен преимущественно против микроорганизмов, которые выживают в фагоцитах и против микроорганизмов, поражающие другие клетки. Система клеточного иммунитета особенно эффективна против клеток, инфицированных вирусами, и принимает участие в защите от грибов, простейших, внутриклеточных бактерий и против клеток опухолей. Также система клеточного иммунитета играет важную роль в отторжении тканей.

Выделяют три вида методов оценки клеточного иммунитета, о которых речь пойдет далее.

Определение количества Т-лимфоцитов, Т-хелперов, Т-супрессоров и лимфоцитов-киллеров

Проводится с помощью иммунофлюоресцентного метода и моноклональных антител к поверхностным рецепторам этих клеток: CD3+ все Т-лимфоциты, СВ 4+-хелперы, СВ 8+-супрессоры, СО 16+-киллеры. До недавнего времени для количественной характеристики Т-лимфоцитов и их подклассов (хелперов, супрессоров, киллеров) использовался тест розеткообразования, т.е. способность лимфоцитов формировать розетки с эритроцитами барана. Однако в настоящее время этот тест утрачивает свое значение, уступая место менее сложному и более специфичному иммунофлюоресцентному методу с использованием моноклональных антител к поверхностным рецепторам лимфоцитов. Упоминание здесь о тестах розеткообразования обусловлено тем, что некоторые результаты, о которых речь пойдет далее, получены с их помощью.

Иммунофлуоресцентный анализ (МФА - метод флуоресцирующих антител , иммунофлуоресценция ) (англ. Immunofluorescence ) - набор иммунологических методов для качественного и количественного определения поверхностных и внутриклеточных антигенов в образцах клеточных суспензий (культур клеток, бактерий, микоплазм, риккетсий, вирусов), образцов крови, костного мозга, альвеолярных смывов, тонких тканевых срезов. Метод позволяет детально анализировать биологические образцы на присутствие определенных антигенных детерминант, характерных для определенных возбудителей или заболеваний, проводить количественную оценку как поверхностных, так и внутриклеточных белков и рецепторов. Исследование и оценка может выполняться вручную при помощи флюоресцентного микроскопа или автоматизировано с использованием проточного цитометра (flow cytometer ) или микрочипового цитометра (сhip cytometer ). Возможно применение конфокального микроскопа и роботизированного флюоресцентного микроскопа (в том числе совмещенных с проточным цитометром) в сочетании с программной системой обработки изображений. Имеющиеся в настоящее время автоматизированные технологии позволяют анализировать в одном образце примерно 50 различных антигенов с использованием набора различных флюоресцентных маркеров в формате высокоинформативной микроскопии и цитометрии (методы носят названия high-content imaging , high-content cytometry , high-content screening ) и примерно вдвое меньшем максимальным набором антигенов с использованием современной проточной цитометрии или конфокальной микроскопии. Основными практическими приложениями являются онкология, микробиология, клеточная биология, генетика, фармакология и др.

Сущность и классификация метода . Сущность метода заключается в визуализации антигена специфическими антителами с флуоресцентными маркерами. Метод конъюгации глобулинов с органическими флюорохромами разработан в 1942 году А. Кунсом (англ.)русск.. [ 1] В настоящее время метод использует как антитела к различным антигенам, так и специфические красители к ДНК (к примеру, DAPI), РНК (к примеру, Sybr Green II), липидам и белкам.

В базовой МФА методике различают прямой метод, разработанный А. Кунсом и Мелвином Капланом, [ 2] и непрямой , разработанный А. Кунсом и Уиллером в первоначальном варианте непрямого МФА с комплементом .

При прямом методе (пМФА ) на исследуемый препарат или в суспензию клеток наносят раствор прямо меченых флюоресцентным красителем антител. Образование комплекса антиген-антитело обнаруживается флюоресцентным сигналом в виде свечения разной степени интенсивности и четкости.

При непрямом методе (нМФА ) на препарат наносят антитела против искомых антигенов (т. н. "первые" антитела), а затем видоспецифичные "вторые" антитела против "первых" антител, что позволяет избежать неспецифических реакций. При этом только вторые антитела коньюгированны с флюоресцентным красителем. К примеру, если при исследовании в качестве "первых" антител используются мышиные антитела - mouse IgG, то в качестве "вторых" используются антивидовые anti-mouse IgG коньюгированные с флюоресцентным красителем. Комплекс антиген-антитело дает флюоресцентное окрашивание только после связывания со "вторым" антителом.

Непрямые методы требуют наличия только антиглобулиновых видовых сывороток с флюорохромами, но при этом необходимо большое количество тестовых контролей. При постановке прямым методом делается только один контроль, хотя в более ранних версиях метода требовалось множество моноспецифических сывороток. Долгое время недостатками прямых видов МФА являлись ограниченная чувствительность из-за наличия возможных перекрестных реакций между близкими по антигенному составу объектами и неспецифическая флуоресценция вследствие адсорбции флуоресцирующих глобулинов на различных элементах препарата. В настоящее время используются коммерческие стандартные конъюгаты, содержащие иммуноглобулины к исследуемым антигенам. Использование биоинженерных иммуноглобулинов и высокая степень очистки антител позволили практически свести на нет неспецифические реакции, что сделало возможным дальнейшее технологическое развитие метода.

Поскольку прямой метод в настоящее время позволяет избежать неспецифических реакций, автоматизированные методики преимущественно используют прямой метод иммунофлуоресценции.

Результаты ручной микроскопической оценки описываются в так называемых "крестах" (от одного + до четырёх ++++) - субъективная градация степени выраженности реакции глазом исследователя. В автоматизированных методах в качестве детектора используются фотоумножители или высокочувствительные флуоресцентные фотокамеры, что позволяет регистрировать сигнал с большой точностью и дает значение относительного уровня флюоресценции (relative fluorescence ratio) в широком диапазоне шкалы. Абсолютное значение высчитывается с помощью контролей или антигенов с известным постоянным содержанием в образце. При использовании автоматизированных методов обработка данных осуществляется специализированными программами для обработки изображений и анализа цитометрических данных.

Значение и перспективы метода . Метод имеет решающее значение в ранней диагностике и лечении онкологических заболеваний (иммуногистохимия, онкогематология), диагностике инфекционных заболеваний (например, определение CD4+ клеток при ВИЧ) и наследственных синдромов. Интенсивно развиваются автоматизированные методы, среди которых направления высокоинформативной микроскопии (high content imaging ) и высокоинформативной цитометрии (high content cytometry) , параллельно развивающиеся с 90-х годов комбинированные методики цитометрии-микроскопии (цитометр-микроскоп), а также методы микрочиповой цитометрии с плазмонной голографией в которых отдельные антитела метятся наночастицами.

Метод моноклональных антител. Моноклональные антитела - антитела, вырабатываемые иммунными клетками, принадлежащими к одному клеточному клону, то есть произошедшими из одной клетки-предшественницы. Моноклональные антитела распознают и связывают антигены для распознавания специфических эпитопов, которые обеспечивают защиту против болезнетворных организмов.

Моноклональные антитела связывают различные белки, которые влияют на активность клеток, такие как рецепторы или другие белки, представленные на поверхности нормальных и раковых клеток. Специфичность моноклональных антител позволяет им связывать раковые клетки и, взаимодействуя с цитотоксическими агентами, такими как сильная радиоактивы, разрушают раковые клетки, не повреждая здоровые.

Раковые клетки, которые способны реплицироваться бесконечно, сливаются с клетками млекопитающих, которые продуцируют специфические антитела, что приводит к образованию гибридом, постоянно продуцирующих антитела. Эти антитела называют моноклональными, которые происходят из одного типа клеток, т.е. из клеток-гибридом. Антитела, получаемые с помощью традиционных методов, получают из клеток различного типа и называют поликлональными.

Моноклональные антитела искусственно производят против специфических антигенов, для связи с антигенами-мишенями. Лабораторное производство моноклональных антител, основанное на получении антигенов из одной клетки, позволяет получать идентичные друг другу моноклональные антитела.

При слиянии культур миеломных клеток с антителами клеток селезенки млекопитающих образуются гибридные клетки/ гибридомы, которые производят моноклональные антитела в большом количестве. Слияние клеток приводит к образованию двух типов клеток, один тип способен расти постоянно, другой тип способен производить чистые антитела в больших количествах. Гибридные клетки производят только одно лучшее антитело, более чистое, чем поликлональные антитела, получаемые с помощью традиционных методик. Моноклональные антитела являются гораздо более эффективными методами, чем традиционные методы лечения, поскольку эти методики воздействуют не только на инородную субстанцию, но и на собственные клетки организма, что вызывает сильные побочные эффекты. Моноклональные антитела взаимодействуют только с инородными антителами/ клетками-мишенями, не оказывая или оказывая минимальные побочные эффекты.

Присутствие большого количества специфических моноклональных антител в крови говорит о присутствии в организме аномального белка. Как правило, этот белок может быть обнаружен в процессе клинического обследования и идентифицирован с помощью скринингового анализа крови, например, с помощью белкового электрофореза. Источником аномального производства моноклональных антител является популяция плазматических клеток в костном мозге.

Антивирусные (9 продуктов): ANT-143 (анти-денге тип 2), ANT-150 (вирус гепатита В), ANT-156 (вирус гепатита С NS3), ANT-158 (вирус гепатита D), ANT-152 (HIV-1 p24), ANT-159(HIV-1 gp41), ANT-151 (HIV-1 gp120), ANT-153 (HIV-2 gp39), ANT-178 (нуклеокапсидный белок SARS), ANT-179 (SARS Spike).

Анти-мышиные лимфоциты (9 продуктов): ANT-175 (CD3), ANT-165 (CD4), ANT-136 (CD11b-FITC), ANT-135 (CD11a), ANT-133, ANT-142 (CD90 Thy-1), ANT-140 (CD90 Thy-1.1), ANT-141 (CD90 Thy-1.2), ANT-139 (B220)

Анти-мышиные цитокины (8 продуктов): ANT-116 (CTLA-4), ANT-105 (интерлейкин-2), ANT-103 (рецептор интерлейкина-2), ANT-108 (интерлейкин-4), ANT-113 (интерлейкин-10), ANT-114 (интерлейкин-12p40), ANT-209 (интерлейкин-12p75), ANT-166 (IFN-гамма).

Античеловеческие лимфоциты (12 продуктов): ANT-206 (CD1A), ANT-207 (CD2), ANT-144 (CD3), ANT-137 (CD3-FITC), ANT-138 (CD3-биотинилированный), ANT-145 (CD4), ANT-132(CD4-FITC), ANT-167(CD4-биотинилированный), ANT-171 (CD5), ANT-148 (CD8), ANT-131 (CD8-FITC), ANT-134 (CD8-биотинилированный).

Античеловеческие хемокины (9 продуктов): ANT-126 (эотаксин-1), ANT-127 (эотаксин-2), ANT-119 (моноцитарный хемотаксический и активирующий фактор), ANT-120 (хемотоксический фактор-3 макрофагов-моноцитов), ANT-118 (воспалительный белок макрофагов-1a), ANT-121 (воспалительный белок макрофагов-3), ANT-212 (белок воспаления макрофагов-3), ANT-212 (b) (белок воспаления макрофагов-3 бета), ANT-170 (фактор активации нейтрофилов).

Античеловеческие цитокины (28 продутов): ANT-128 (нейротропный фактор головного мозга), ANT-183 (белок морфогенеза костей-2), ANT-169 (эпидермальный фактор роста), ANT-187 (эритропоэтин), ANT-196 (эритропоэтин клон NYRhEPO), ANT-204 (анти-FAS-антитело), ANT-205 (FAS-активирующее антитело), ANT-197 (гормон роста), ANT-129 (КОЕ макрофагов-гранулоцитов), ANT-184 (КОЕ гранулоцитов), ANT-122 (нейтрализатор интерферона-альфа), ANT-208, ANT-185 (интерферон-бета), ANT-123 (интерферон-гамма), ANT-102(интерлейкин-2), ANT-104 (рецептор интерлейкина-2), ANT-106 (интерлейкин-3), ANT-107 (интерлейкин-4), ANT-109 (интерлейкин-6), ANT-110 (интерлейкин-7), ANT-111(интерлейкин-8), ANT-112 (интерлейкин-10), ANT-115 (интерлейкин-15), ANT-172 (лептин), ANT-117 (нейротрофин-4), ANT-124 (фактор некроза опухолей-альфа), ANT-168(трансфоримрующий фактор роста-бета), ANT-125 (фактор роста ЭПР).

Другие антитела: (25 продуктов): ANT-191 (СD20), ANT-130 (хламидия LPS), ANT-211 (c-Myc), ANT-146 (FLAG), ANT-186 (Neisseria Gonorrhea), ANT-176 (H-2K), ANT-101 (HA-tag белок),ANT-194 (поверхностный антиген Ck вируса гепатита В), ANT-147 (hCG beta core), ANT-149 (лизозим Hen Egg), ANT-154 (гепараназа человека-1 3/17), ANT-202 (легкие цепи каппа Ig),ANT-203 (легкие цепи лямбда Ig), ANT-193 (гепараназа человека-1 130), ANT-201 (IgA 1&2), ANT-174 (компонент IgA Sec), ANT-173 (IgG-Fc), ANT-100 (инсулин), ANT-177 (белок, связывающий мальтозу), ANT-199 (миелин олигонуклецит гликопротеин), ANT-198 (Staphylococcus aureus, устойчивый к метициллину), ANT-192 (p53 scFv), ANT-200 (фосфолипидный белок миелина), ANT-195 (anti-Tetanus Toxoid scFv), ANT-164 (глутатион-S-трансфераза).

Лейкоцитарные тесты. Лейкоцитарные тесты - группа диагностических тестов, в которых показателем для оценки специфической реактивности организма и функции иммунной системы служат изменения различных свойств лейкоцитов. К лейкоцитарным относятся тест розеткообразования, бластотрансформация лимфоцитов, торможение миграции макрофагов, аллергическая альтерация лейкоцитов и тест с глюкокортикоидрезистентной фракцией лимфоцитов.

Тест розеткообразования основан на различиях рецепторной структуры лейкоцитов (лимфоцитов, гранулоцитов, моноцитов), которые при взаимодействии с эритроцитами могут спонтанно присоединять последние к своей поверхности. При этом образуются фигуры, напоминающие розетки, в центре которых находится лейкоцит, а вокруг него располагаются не менее 3-5 эритроцитов. Существует несколько вариантов этого теста. При прямом тесте в формировании розеток участвуют антигены самих эритроцитов, а при непрямом - антигены, искусственно фиксированные на поверхности эритроцитов. При прямом тесте образуются спонтанные и иммунные розетки: спонтанные розетки - между лимфоцитами человека или животных и эритроцитами барана; иммунные - с эритроцитами, использованными для иммунизации донора лейкоцитов. Прямой тест используют для определения количества Т-лимфоцитов (т.к. эти клетки несут рецепторы к эритроцитам барана), широко применяют для оценки иммунного статуса, а в некоторых случаях - для выделения В-клеток. Розетки могут формироваться за счет иммуноглобулинов, которые образуются в В-клетках или фиксируются на клетках (гранулоцитах, моноцитах). Феномен розеткообразования может возникать не только с эритроцитами, но и с другими клетками и искусственными гранулами.

Сущность метода заключается в выделении взвеси лейкоцитов (лимфоцитов) обследуемого, инкубации их со взвесью эритроцитов барана (обработанных или не обработанных антигеном) и подсчета числа розеткообразующих клеток.

Бластотрансформация лимфоцитов - превращение малых зрелых лимфоцитов в малодифференцированные клетки типа бластов. Различают спонтанную и индуцированную бластотрансформацию лимфоцитов. Последняя возникает под влиянием неспецифических митогенов или специфических аллергенов (антигенов). К взвеси лейкоцитов крови добавляют раствор аллергена, смесь культивируют в течение 5-7 дней, а затем под микроскопом определяют процентное содержание лимфобластов в окрашенных мазках. Для более точной оценки бластотрансформации лимфоцитов к взвеси клеток добавляют 3 Н-тимидин, который включается в ДНК клеток. По разнице радиоактивности образцов клеток, культивированных с антигеном и без него, судят о степени специфической бластотрансформации лимфоцитов под влиянием аллергена (антигена).

Торможение миграции макрофагов происходит под влиянием специфического антигена. Существует несколько модификаций теста, наиболее распространенный - капиллярный. В лунку с питательной средой помещают отрезок капилляра, заполненный клетками, и добавляют в нее испытуемый антиген. После культивирования клеток в течение 24 ч при 37° измеряют один из параметров мигрировавших из капилляра клеток (диаметр, площадь миграции и др.). Отношение опытного параметра к контрольному (без антигена) составляет индекс миграции. Реакция считается положительной, если опытные и контрольные показатели различаются более чем на 20 %. Описаны методы оценки миграции клеток из капли агарозы, содержащей клетки, и миграции клеток из лунки под агарозу. В качестве тестируемых клеток в клинике наиболее часто используют лейкоциты крови, а в эксперименте - макрофаги и иногда лимфоциты. Тормозят миграцию клеток медиаторы, выделяющиеся из сенсибилизированных к данному антигену лимфоцитов, которые всегда присутствуют во взвеси испытуемых клеток: фактор торможения миграции макрофагов (MIF), фактор торможения миграции лейкоцитов (LIF) и др. Реакции торможения миграции макрофагов и лейкоцитов отражают состояние гиперчувствительности замедленного типа. клеточный иммунитет защитная лимфоцит

Аллергическая альтерация лейкоцитов - повреждение лейкоцитов под влиянием специфического аллергена.

Для выявления повреждения нейтрофильиых лейкоцитов используют тест ППН (показатель повреждения нейтрофилов) по Фрадкину. Кровь больных, страдающих аллергией, культивируют с аллергеном в течение 2 ч . Затем готовят мазки, которые окрашивают на гликоген с докраской ядер клеток гематоксилином. При положительном тесте наблюдается усиление амебоидной реакции нейтрофилов на аллерген, специфичный по отношению к циркулирующим в крови антителам. Амебоидная реакция сопровождается насыщением гликогеном псевдоподий клеток. Для оценки специфического повреждения лейкоцитов крови широко используется люминесцентная микроскопия. Пусковым механизмом аллергической альтерации клеток является образование комплекса, состоящего из аллергена и антител, связанных с поверхностью клеток. Альтерация лейкоцитов под влиянием специфического аллергена - показатель аллергии немедленного типа. Альтерация сопровождается не только морфологическими изменениями клеток, но и выделением из них биологически активных веществ, например освобождением гистамина.

Лейкоцитарный тест с глюкокортикоидрезистентной фракцией лимфоцитов - относительная и абсолютная величина лимфоцитов в единице объема крови, устойчивая к литическому действию глюкокортикоидов. Все лимфоциты, толерантные в условиях культивации in vitro к литическому действию глюкокортикоидов, называются глюкокортикоидрезистентными. В зависимости от используемого глюкокортикоида их называют кортизолрезистентными, кортикостеронрезистентными и т.д. Тест отражает степень активации иммунной системы под влиянием антигенной стимуляции, позволяет оценивать изменения этой активации в процессе развития заболевания и, следовательно, имеет прогностическое значение. При инфекционных, инфекционно-аллергических и аллергических заболеваниях отмечается увеличение кортизолрезистентной фракции лимфоцитов. У взрослых в норме она составляет 60-64 % или 1100-1250 лимфоцитов в 1 млк крови.

Оценка функциональной активности Т-лимфоцитов

Этот тест основан на способности Т-лимфоцитов пролиферировать в ответ на стимуляцию неспецифическим митогеном (субстанциями, названными так из-за способности вызывать митозы в лимфоцитах) и продуцировать интерлейкины (ИЛ-1 и ИЛ-2). Необходимо отметить, что раньше пролиферативную активность лимфоцитов оценивали по количеству бластов (бласттрансформация) и митозов, появляющихся в стимулированной митогеном культуре, в настоящее время - используя радиоактивную метку и ее подсчет на сцинтилляционном счетчике.

Пролиферативную активность Т-лимфоцитов оценивают по интенсивности синтеза ДНК в ответ на стимуляцию митогеном (поликлональная стимуляция) или антигеном (моно- и олигоклональная стимуляция). В последнем случае применяются распространенные антигены или аллоантигены. Интенсивность синтеза ДНК оценивают по включению в нее меченных радиоактивным изотопом нуклеозидов, например 3Н-тимидина. Результаты обычно выражают в импульсах в минуту (имп/мин) и в виде индекса стимуляции - отношение радиоактивности стимулированных и нестимулированных лимфоцитов. Митогены стимулируют пролиферацию значительной части Т-лимфоцитов, поэтому результат оценивают обычно через 3 сут. Антиген стимулирует пролиферацию только тех Т-лимфоцитов, которые несут рецептор к нему, поэтому индуцированную антигеном пролиферацию оценивают через 5-7 сут. Для оценки пролиферативной активности Т-лимфоцитов, как и при проведении кожных проб, применяют набор широко распространенных антигенов. У ВИЧ-инфицированных пролиферативная реакция Т-лимфоцитов на распространенные антигены может быть снижена уже на ранних стадиях заболевания. Прогрессирование ВИЧ- инфекции и других иммунодефицитов сопровождается снижением реакции Т-лимфоцитов на аллоантигены, а впоследствии - и на митогены. Отсутствие реакции на митогены свидетельствует о тяжелой недостаточности клеточного иммунитета.

Помимо того исследование Т-лимфоцитов проводят, оценивая на цитотоксичность . Обычно оценивают цитотоксичность, ограниченную по HLA, опосредованную лимфоцитами CD8. Клетками-мишенями служат собственные клетки, несущие на своей поверхности чужеродный антиген, связанный с антигенами HLA класса I. Лимфоциты CD8играют важную роль в защите от вирусных инфекций. Наряду с лимфоцитами CD8 ограниченную по HLA цитотоксичность осуществляют некоторые лимфоциты CD4, распознающие антиген в комплексе с антигенами HLA класса II. Обе субпопуляции лимфоцитов несут антигенраспознающий рецептор, образованный альфа- и бета-цепями. Лимфоциты CD8 с антигенраспознающим рецептором, образованным гамма- и дельта-цепями, участвуют в цитотоксичности, не ограниченной по HLA. Эти лимфоциты присутствуют в крови в незначительном количестве и разрушают клетки- мишени подобно NK-лимфоцитам, то есть без предварительной иммунизации. Оценка клеточной цитотоксичности необходима для диагностики иммунодефицитов. Оценку цитотоксической активности лимфоцитов проводят следующим образом:

1) клетки-мишени обрабатывают радиоактивной меткой (51Сr);

2) к меченым клеткам-мишеням добавляют исследуемые лимфоциты;

3) гибель клеток-мишеней оценивают по выходу радиоактивной метки в раствор. Полученные результаты сравнивают с нормальными показателями.

При исследовании ограниченной по HLA цитотоксичности исследуемые Т-лимфоциты предварительно инкубируют с антигеном, присутствующим на клетках-мишенях.

Оценка системы натуральных киллеров

Для этого используется цитотоксический тест, в котором клетками-мишенями чаще всего служит линия клеток К-562, меченная 3 Н-уридином. Тестируемые лимфоциты вносят в культуру К-562, инкубируют в присутствии РНКазы, а затем оценивают уровень радиоактивного уридина, высвободившегося из лизированных клеток-мишеней.

Размещено на Allbest.ru

Подобные документы

Формы, механизмы, органы, регуляция иммунитета. Субпопуляции Т-лимфоцитов, их функции. История открытия регуляторных Т-клеток. Эффективность микробиологической диагностики. Иммунная регуляторная система. Будущее трансплантологии, технические трудности.

контрольная работа , добавлен 11.05.2016


Основные типы лимфоцитов по функциональным и морфологическим признакам как клеток иммунной системы и ее ключевого звена. Дезоксирибонуклеазы секреторных гранул лимфоцитов периферической крови пациентов с АБА. Методы выделения и изучения лимфоцитов.

курсовая работа , добавлен 07.12.2013


Иммунитет – способ защиты организма от болезнетворных микроорганизмов за счет выработки антител. Обзор схемы клеточного и гуморального иммунитета. Нарушения фагоцитарной системы. Методы оценки иммунитета. Реакция иммунного гемолиза и цитотоксический тест.

презентация , добавлен 11.11.2014


Общая характеристика B-лимфоцитов. Характеристика субпопуляций, рецепторы и маркеры В-лимфоцитов. Антигенраспознающие рецепторы B-клеток: общая характеристика. Субпопуляции В-лимфоцитов, распознание антигенов рецепторами иммуноглобулиновой природы.

реферат , добавлен 02.10.2014


Вирусы как группа живых существ, не имеющих клеточного строения, их формы, генетические связи с представителями флоры и фауны Земли. Заражение системы клеточного иммунитета человека и сущность СПИДа. Происхождение и размножение вирусов, их вред и польза.

творческая работа , добавлен 24.02.2010


Последовательность образования антител. Дентдритные клетки и их классификация. Клетки Лангерганса, их происхождение и функции, методы выявления. Презентация антигена. Роль клеток в формировании клеточного и гуморального антивирусного иммунитета.

реферат , добавлен 09.02.2012


Понятие и виды иммунитета, назначение иммунной системы. Факторы и признаки ослабления иммунитета, методы его повышения. Механизм действия иммунитета: макрофаги, Т-хэлперы, В-лимфоциты, выработка иммуноглобулинов (антител), Т-супрессоры, клетки-киллеры.

реферат , добавлен 09.02.2009


Понятие и внутренняя структура цитокинов как важного элемента при взаимодействии разных лимфоцитов между собой и с фагоцитами. Оценка их биологической роли, характеристика и значение в организме. Варианты проявления действия цитокинов, иммунный ответ.

презентация , добавлен 22.10.2015


Специфичность и ее значение, взаимодействие антигена и антитела. Основные элементы иммунной системы организма, селекция антител, структура белковой молекулы. Теория "клональной селекции", возникновение разнообразия лимфоцитов или их предшественников.

реферат , добавлен 05.06.2010


Основные функции иммунной системы. Генез Т- и В-лимфоцитов. Общие закономерности нарушений иммунной системы. Способность организма отвечать на действие антигена клеточными и гуморальными реакциями. Процессы развития патологических процессов в организме.